Базофильные красители

Принципы и методы окраски гистологических препаратов. Базофилия, оксифилия

В основе окрашивания клеток и тканей лежат физико-химические процессы (диффузия, адсорбция, абсорбция, растворимость и др.), происходящие как в красителе, так и в микроструктурах. Большое значение имеют плотность ткани и дисперсность красителя, которые определяют последовательность и скорость окрашивания.

Целью окрашивания является более отчетливое выявление различных компонентов клеток и тканей. Некоторые красители обеспечивают этот эффект, растворяясь в выявляемых компонентах, например нейтральных жирах.

Другие красители вызывают химическую реакцию, например выявление железа с образованием берлинской лазури в кислой среде.

Во многих случаях процесс окрашивания возможен только при наличии протравы, например гематоксилин окрашивает ткань в присутствии солей металлов.

Все красители, используемые в гистологической технике, подразделяются на 3 типа:

Тип красителя	Пример	Окрашиваемые структуры
Кислые красители	Кислоты и кислые соли : -эозин -кислый фуксин.	а) Окрашиваемые структуры называются оксифильными (имеющими сродство к кислым красителям). б) Это белковые компоненты цитоплазмы и неклеточные структуры (коллагеновые волокна).
Основные красители	Основные соли : -гематоксилин -азур 2, кармин.	а) Красящиеся структуры – базофильные (сродство к основным красителям). б) Это структуры, богатые нуклеиновыми или иными кислотами · ядра, · рибосомы, · аморфный компонент межклеточного вещества.
Нейтральные красители	Смесь двух красителей: основного (азур 2) и кислого (эозин).	а) Структуры, воспринимающие кислые красители, окрасятся эозином; пример – специфические гранулы в эозинофильных лейкоцитах. б) Ядра всех клеток окрашиваются азуром 2.

2. Рыхлая волокнистая с/ткань:много клеток, мало межклеточного вещества (волокон и аморфного вещества). Локализация: образует строму многих органов, адвентициальная оболочка сосудов, располагается под эпителиями – образует собственную пластинку слизистых оболочек, подслизистую основу, располагается между мышечными клетками и волокнами.

Клетки: фибробласты (5 разновидностей: юные, зрелые, фиброциты, миофибробласты, фиброкласты; образуются из малодифференцированных клеток мезенхимы; отростчатые клетки с небольшим количеством цитоплазмы; функции – образование коллагеновых и эластических волокон, аморфного вещества соединительной ткани, образование ферментов, разрушающих волокна и аморфное вещество – коллагеназы, эластазы, гиалуронидазы, синтез биологически-активных веществ ),макрофаги (образуются из моноцитов крови), тучные клетки, и др.

3. Печень: источники развития, особенности кровообращения. Классическая печеночная долька. Портальная долька. Ацинус.

СТРОМА капсула, межсегментарная и междольковая соединительная ткань

капсула образована плотной волокнистой соединительной тканью покрыта серозной оболочкой

межсегментарная и междольковая соединительная ткань представлена рыхлой соединительной тканью

ПАРЕНХИМА образована печеночными дольками

долька печени представляет собой шестигранную призму, основу которой образуют гепатоциты, расположенные тяжами

Кроме гепатоцитов в состав дольки входят:

· звездчатые клетки (клетки Ито, липоциты), имеющие множество отростков и содержащие в цитоплазме липидные включения с витамином А; эти клетки имеют мезенхимальное происхождение и являются аналогами фибробластов; они могут активироваться и превращаться в миофибробласты; они участвуют в процессах роста и пролиферации гепатоцитов, развитии цирроза, регулируют кровоток в синусоидных капиллярах и ток желчи в желчных капиллярах

· триады печени проходят вокруг дольки, состоят из ветвей печеночной артерии, воротной вены и желчного протока

· внутридольковые желчные капилляры начинаются слепо в центральных отделах дольки и идут к периферии дольки, где впадают в вокругдольковый желчный проток, желчь по ним течет от центра к периферии дольки; внутридольковый желчный капилляр не имеет собственной стенки, а образован мембранами соседних гепатоцитов, или другими словами, представляет собой узкую щель между гепатоцитами

· внутридольковые синусоидные капилляры, которые образуются за счет слияния вокругдольковых артерии и вены (ветви печеночной артерии и воротной вены), и которые идут между гепатоцитами от периферии к центру дольки и впадают в центральную вену, кровь по этим синусоидам течет от периферии к центру дольки; между капилляром и гепатоцитами имеется перисинусоидное пространство (пространство Диссе)

· центральная вена располагается в центре дольки, принимает кровь из внутридольковых синусоидных капилляров

Все дольки соединены между собой междольковой, межсегментарной соединительной тканью

Строение стенки внутридолькового синусоидного капилляра

· фенестрированный эндотелий, к которому прикреплено большое количество макрофагов(клетки Купфера),

· базальная мембрана отсутствует, имеется небольшое количество ретикулярных волокон

· образуется за счет слияния вокругдольковых артерии и вены

· идет от периферии к центру дольки, где впадает в центральную вену

· перисинусоидное пространство (Диссе) представляет собой щель между стенкой синусоидного капилляра и гепатоцитами, здесь также находятся звездчатые клетки (клетки Ито)

ИСТОЧНИКИ РАЗВИТИЯ

мезенхима – капсула и прослойки соединительной ткани, звезчатые клетки

энтодерма – гепатоциты, эпителий желчных протоков;

костный мозг – клетки Купфера

1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 |

19

| 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 |

Источник: https://studall.org/all3-2763.html

Рабочая классификация красителей, используемых в биологической микроскопии

Существует немало рабочих классификаций красителей, использующихся в биологии. При изложении материала авторы редко придерживаются чёткого разделения. Обычно различают четыре больших группы красителей:

1. Основные (или ядерные) красители. Они избирательно окрашивают ядра клеток и базофильные структуры. Кстати, сам термин «базофильный» появился по названию этой группы красителей, так как в переводе с латинского basis — основной.
2. Кислые (или цитоплазматические) красители. Окрашивают преимущественно цитоплазму, реже клеточные стенки и тому подобного.
3. Нейтральные красители. К этой группе, по нашему мнению, должны быть отнесены и такие красители, которые избирательно окрашивают компоненты цитоплазмы, например, судан III или нильский синий, окрашивающие капельки жира.
4. Флюорохромы. Группа красителей, способных флюоресцировать при той или иной длине волны возбуждающего света. Несмотря на то, что мы выделили эти красители в самостоятельную группу, большинство из них следовало бы отнести к цитоплазматическим или, реже, к ядерным красителям.

Ядерные красители

Ядерные красители представляют собой едва ли не самую многочисленную группу красителей вообще. Основная цель обработки данными веществами состоит в том, чтобы выявить материал, близкий к ДНК или РНК. По механизму окрашивания ядерные красители делят на две группы, принципиально отличающиеся друг от друга. Это основные красители и протравные красители.

Основные красители

Применение основных красителей (все они являются «катионными») основано на образовании соединений типа солей в присутствии ДНК или РНК.

1. Азокрасители:— янус зелный В;

   — бисмарк коричневый.

2. Сафранины:— сафранин Т;— сафранин А;— сафранин О;

   — феносафранин.

3. Оксазиновые красители:— бриллиантовый крезиловый синий;

   — крезиловый прочный фиолетовый.

4. Тиазины:— тионин;— азуры С, А, В;— метиленовый синий;

   — толуидиновый синий.

5. Трифенилметановые:— пара-розанилин;— кристаллический фиолетовый;— метиловый фиолетовый;— метиловый зелёный;

   — альциановый синий;

Протравные красители

В основу методик применения протравных красителей легла способность ряда соединений образовывать ярко окрашенные лаки с ионами металлов — лития, железа, хрома. В эту группу входят:

1. Наиболее известные и используемые красители:— гематоксилин;— кармин (карминовая кислота);— ализарин-цианин;— ализарин;— бразиллин;

   — галлоцианин.

2. Малоизвестные и редко применяющиеся красители:— пурпурин;— ализариновый синий;— ализариновый чёрный;— ализариновый зелёный;— антрапурпурин;— хинализарин;— чисто-синий В;

   — антраценовый синий.

В зависимости оттого, ион какого металла входит в состав протравного реагента, конечный цвет окраски может меняться от красного до зеленовато-чёрного. Примеры такой зависимости приведены в таблице.

Зависимость итоговой окраски от иона металла протравного реагентаНазвание Цвет окраски ядраAl Cr Fe

 

 

 

 

 

Ализарин	красный	—	—
Пурпурин	красный	—	—
Кармин (карминовая кислота)	красный	—	—
Бразилин	красный	серо-коричневый	зеленовато-чёрный
Гематоксилин	синий	серо-синий	серо-чёрный
Галлоцианин	—	синий	серо-чёрный
Антраценовый синий	—	синий	серо-чёрный

Цитоплазматические красители

Эта группа красителей представлена большей частью сульфоновыми и карбоновыми кислотами, которые в тканях прочно связываются с белками и в результате окрашивают большинство внеядерных структур:

• эозин;
• аурамин О;
• эритрозин;
• родамин В;
• родамин 3G;
• родамин 6G;
• пиронин G;
• акрифлавин;
• флюоресцеин;
• акридиновый оранжевый;
• конго красный;
• акридиновый жёлтый;
• криофосфин;
• нейтральный красный;
• толуидиновый синий.

Цитоплазматические красители в сочетании с фосфорно-вольфрамовой кислотой, фосфорно-молибденовой кислотой могут окрашивать специфические структуры клеток и тканей, например, коллаген.

В большинстве методик цитоплазматические красители используются для контраста после окраски ядерными красителями.

Несколько реже прибегают к такому свойству цитоплазматических красителей, как способность окрашивать живые клетки без нарушения функций последних (так называемые витальные красители); в таких методиках применяют очень большие разведения красителей — от 1:1000 до 1:20000.

Нейтральные красители

Группа нейтральных красителей невелика. Например, важное практическое значение имеют красители, окрашивающие жиры:

• судан III;
• судан IV;
• судан чёрный;
• нильский синий.

Флюорохромы

Флюорохромы в данной классификации стоят особняком, потому что эта группа включает и кислые, и основные красители.

Главной отличительной чертой всех этих соединений является способность излучать свет определённой длины волны под воздействием лучей ультрафиолетового, фиолетового и синего спектра.

Молекула красителя, поглотив квант падающего света, испускает световое излучение большей длины волны, чем длина волны падающего света. Так, например, флюоресцеин, поглощая свет с длиной волны 420-490 нм, излучает свет с длиной волны 520-540 нм.

При этом объекты, окрашенные флюоресцеином в люминесцентном микроскопе, светятся зелёным светом.

Некоторые области применения флюорохромов приведены в таблице.

Области применения некоторых флюорохромов (выделены наиболее часто используемые флюорохромы)Цель окраски Используемый флюорохром Диапазон возбуждения Диапазон свечения

 

 

 

Ядро (ДНК/РНК)	Акридиновый оранжевый	Голубой свет (420-490 нм)	520 нм
Пропидиум иодид	Зелёный (530-560 нм)	580 нм
Этидиум бромид	Зелёный (530-560 нм)	580 нм
Хромомицин А	Голубой свет (420-436 нм)	490 нм
Акрифлавин	Голубой свет (420-436 нм)	490 нм
Хёхст 33258	Ультрафиолет (340-380 нм)	430 нм
Пиронин G	Зелёный (530-560 нм)	580 нм
Берберин сульфатКориофосфин О Фосфин 3R	—	—
Внутриклеточные жиры	Нильский красный	Голубой свет (450-490 нм)	520 нм
Эозин Б	Зелёный (530-560 нм)	580 нм
Белки/гистоны	Эозин Б	Зелёный (530-560 нм)	580 нм
Тиазиновый красный Р	Зелёный (530-560 нм)	580 нм
Сульфофлавин	Ультрафиолет (340-380 нм)	430 нм
Внутриклеточный кальций	Индо 4	—	—
Митохондрии	Родамин 123	—	—
Тромбоциты	Мепакрин	355 нм	425 нм
Бактерии	Акридиновый оранжевый	Голубой свет (420-490 нм)	520 нм

Источник: http://www.ysam.ru/class.html